Caracterización molecular del virus de la enfermedad de Gumboro a través de la transcripción en reversa-reacción en cadena de la polimerasa combinado con análisis de enzimas de restricción - Molecular characterization of the infection bursal disease virus

Abstract

Este estudio buscó demostrar la presencia del virus de la enfermedad infecciosa de la bursa (IBDV), en tres explotaciones avícolas del centro norte del Ecuador y caracterizar las cepas encontradas a través de técnicas moleculares RFLPs. Las bursas de 120 aves de engorde y de 11 aves criollas sanas fueron aisladas y sometidas al procedimiento de extracción de ARN viral ácido guanidin-tiocianato-fenol-cloroformo. Diez bursas fueron sometidas a la extracción viral a través del kit comercial Nucleospin®. La transcripción reversa/reacción en cadena de la polimerasa fue utilizada para la caracterización del ARN viral extraído utilizando un set de primers que amplifican un fragmento de 248pb de la región hipervariable del gen VP2. Ochenta aves de engorde (66.6%) y nueve aves criollas (81%) fueron positivos para la presencia del IBDV a través del RT/PCR. El ARN viral de los pollos analizados fue sometido a la restricción enzimática utilizando cinco enzimas diferentes TaqI, DraI, SacI, StyI y SspI. Todas las muestras con ARN bursal mostraron el mismo patrón de RFLPs para todas las enzimas, siendo cortado por las enzimas TaqI y DraI dando lugar a dos fragmentos de +/-198 y +/-50pb. Este patrón de restricción es característico de la cepa variante Delaware A. El control positivo, vacuna BIOMUNE, fue restringido por las enzimas TaqI, StyI y SacI, mostrando dos fragmentos de +/-198 y +/-50pb, patrón característico de la cepa Lukert. Los diferentes patrones de restricción evidenciaron que existe variabilidad genética entre la vacuna y las muestras experimentales. Los resultados demuestran que la técnica del RT/PCR puede ser utilizada para la rápida detección del IBDV y para la diferenciación entre cepas del virus en combinación con la restricción enzimática.