Dois novos sistemas de diagnose precoce da meleira do mamoeiro

Abstract

A diagnose da meleira do mamoeiro (Carica papaya)tem sido feita mediante observação de sintomas que aparecem principalmente nos frutos ou pela detecção de dsRNA de cerca de 12 kb, purificado a partir do látex em coluna de CF11, em gel de agarose ou poliacrilamida. Os sintomas nos frutos são tardios e permitem longa permanência de plantas infectadas no campo e o processo usado para detectar dsRNA é laborioso, não se prestando a detecção em larga escala. Visando disponibilizar protocolos de diagnose precoce da meleira que possam ser usados em larga escala, o presente trabalho apresenta dois métodos de detecção relativamente baratos, rápidos e que permitem o manuseio de dezenas de amostras por dia. Os dois métodos utilizam o látex extraído dos frutos, folhas ou caule de plantas, e se baseiam na extração e visualização de ácidos nucléicos. A presença do vírus é confirmada pela visualização do seu dsRNA em gel de agarose (1%) em 1X TBE. Com esta técnica temos conseguido resultados confiáveis a ponto de diagnosticar precocemente a meleira em plantas ainda jovens e em plantas assintomáticas.Papaya sticky disease was first reported affecting papaya (Carica papaya) in Brazil in the late 80s. Today this disease is found in the papaya production areas throughout Brazil, and in some of them it became the main limiting factor for the papaya industry. The primary disease symptom is an excessive exudation of highly fluid latex that becomes dark as result of oxidation and turns the fruit unmarketable. It is caused by a new virus that has an isometric particle (40-50 nm in diameter), and a unique 12 kb long dsRNA molecule. Since its diagnosis is done mainly by observation of the symptoms on the fruit, infected plants may be source of inoculum for several months before diagnosis. Another form of diagnosis is the detection of dsRNA from leaves and latex using CF11 columns. This is a laborious system not suited to large scale usage. The present work presents two cheap and fast diagnostic protocols. These protocols use latex obtained from fruits, leaves and stems, and are based on the extraction and visualization of nucleic acids. Presence of the virus is confirmed by the visualization of dsRNA on agarose (1%) gel in 1X TBE. Using these protocols it is possible to confirm the presence of the virus in young and assymptomatic plants.