Comparação entre os métodos de Ziehl-Neelsen modificado e Acid-Fast-Trichrome para a pesquisa fecal de Cryptosporidium parvum e Isospora belli

Abstract

Devido a crescente importância dos coccídios intestinais (Cryptosporidium, Isospora e Cyclospora) como parasitos oportunistas, é fundamental para os laboratórios diferenciar morfologicamente estes protozoários; a técnica de Ziehl-Neelsen modificada (ZNm) é amplamente utilizada para este fim; recentemente, foi proposto um novo procedimento, a coloração combinada do ácido tricrômico (Acid-Fast-Trichrome - AFT). O objetivo do presente estudo foi comparar os processos AFT e ZNm para a detecção destes coccídios em amostras fecais de pacientes portadores do vírus VIH. Foram selecionados dois grupos de indivíduos, para inclusão no estudo, segundo a presença (n=60) ou ausência de diarréia (n=60). As amostras de fezes foram coletadas em solução de formalina 10% e os esfregaços fecais preparados i) diretamente das fezes e ii) após concentração prévia a 500xg (10 minutos), foram submetidos aos diferentes processos de coloração. Considerando-se a positividade por técnica (AFT e ZNm), verificou-se a superioridade do procedimento de ZNm (n=19; 100% dos casos positivos) sobre o de AFT (n=8; 42,1%). Ambos possibilitaram a identificação dos 101 casos verdadeiramente negativos. Coccidiose intestinal foi mais frequente entre os pacientes que apresentaram diarréia (26,6%) em comparação à positividade observada entre os indíviduos assintomáticos (5%) sendo que C. cayetanensis não foi detectada em ambos os grupos. Foi de nosso interesse avaliar a aplicabilidade da técnica AFT para a coloração deste protozoário. Devido à sensibilidade e especificidade obtida neste estudo (100%), conclui-se que o método de ZNm continua sendo o mais indicado para o diagnóstico da criptosporidiose e isosporose, principalmente quando associado ao procedimento de centrífugo-concentração (500xg, 10 minutos). Embora a coloração AFT tenha baixo custo, faz-se necessário o seu aperfeiçoamento pois este procedimento permite o diagnóstico simultâneo dos coccídios intestinais (C. parvum, I. belli e C. cayetanensis) e dos microsporídios.Due to the importance of Cryptosporidium parvum, Cyclospora cayetanensis and Isospora belli as opportunistic parasites, it is essential for laboratories to morphologically differentiate these coccidia. Among the recommended methods for diagnosis of C. parvum and I. belli is the Modified Ziehl-Neelsen stain (MZN) and recently a new technique, the Acid-Fast-Trichrome (AFT) was proposed. The purpose of this study was to compare the AFT and MZN techniques regarding the detection of C. parvum and I. belli oocysts in stool samples of HIV-positive patients. According to the presence (n=60) or absence of diarrhea (n=60), two groups were selected for inclusion in this study. The stool samples were collected in 10% formalin solution and the pellets, obtained without and after centrifugation-concentration (500xg; 10 min), were submitted to both stain techniques. Considering the positivity of the techniques (AFT and MZN), we observed the superiority of MZN stain (n=19; 100% positive cases) over AFT (n=8; 42.1%). The identification of the 101 truly-negative cases was possible with both techniques, but when the AFT stain was used, the oocysts showed a variable inner stain degree, which resulted in false-negatives. Enteric coccidiosis was more frequent among the patients who presented diarrhea (26.6%) compared to asymptomatic individuals (5%); C. cayetanensis was not detected in these groups. We were interested in evaluating the employment of AFT for the Cyclospora oocyst stain. Based on the sensitivity and specificity obtained in this study (100%), we concluded that the MZN technique is still the most indicated for routine use in clinical analysis laboratories, for the diagnosis of cryptosporidiosis and isosporosis, especially when it was used together with the centrifugation procedure (500xg; 10 min). Our results showed that with some improvements, AFT would be a simple and inexpensive technique appropriate for use in the diagnosis of intestinal coccidia (C. parvum, C. cayetanensis and I. belli). It can also be extended to the detection of microsporidia.