AVALIAÇÃO DA REGIÃO ESPAÇADORA 16S-23S DNAR COMO MARCADOR MOLECULAR PARA DIFERENCIAÇÃO DE ACIDOVORAX AVENAE SUBSP. CATTLEYAE E BURKHOLDERIA GLADIOLI PV. GLADIOLI PATOGÊNICAS A ORQUÍDEAS

Abstract

RESUMO A região espaçadora 16S-23S DNAr foi avaliada como marcador molecular para a diferenciação dos patógenos de orquídeas, Acidovorax avenae subsp. cattleyae e Burkholderia gladioli pv. gladioli. Outras espécies pertencentes a esses dois gêneros como B. gladioli pv. alliicola, A. avenae subsp. avenae, A. avenae subsp. citrulli, A. anthurii, A. facilis, A. delafieldii e A. konjaci também foram analisadas. A amplificação por PCR dessa região produziu um fragmento de aproximadamente 1.100 pares de bases para todas as linhagens testadas. Os produtos obtidos foram submetidos a digestões com as enzimas Afa I, Alu I, Hae III e Hpa II e os resultados mostraram perfis distintos de RFLP para A. avenae subsp. cattleyae de B. gladioli pv. gladioli com todas as endonucleases testadas. As seqüências da região espaçadora 16S-23S DNAr foram alinhadas e a análise filogenética confirmou as diferenças entre A. avenae subsp. cattleyae e B. gladioli pv. gladioli. A técnica de PCR-RFLP mostrouse eficiente e muito útil para a identificação desses patógenos, uma vez que eles causam sintomas muito semelhantes em orquídeas.ABSTRACT The 16S-23S rDNA spacer region was evaluated as a molecular marker to differentiation of orchids pathogens, Acidovorax avenae subsp. cattleyae and Burkholderia gladioli pv. gladioli. Other species belonging to the two genera such as B. gladioli pv. alliicola, A. avenae subsp. avenae, A. avenae subsp. citrulli, A. anthurii, A. facilis, A. delafieldii and A. konjaci were also analyzed. The PCR amplification of the 16S-23S rDNA spacer region produced a fragment of 1,100 base pairs. The products obtained from all strains were digested with Afa I, Alu I, Hae III and Hpa II and the results showed distinct RFLP patterns for each endonuclease tested. The sequences of 16S-23S rDNA spacer region were aligned and the phylogenetic analysis confirmed the differences between A. avenae subsp. cattleyae e B. gladioli pv. gladioli. The PCR-RFLP technique was very efficient and useful to the identification of these pathogens since they cause very similar symptoms in orchids.