Buscando agentes antifúngicos naturales: Ensayo sensible para detectar inhibidores de endo-1,3-β-glucanasa en extractos crudos de plantas

Abstract

La enzima 1,3-β-glucanasa está impli­cada en la construcción de la pared celular de hon­gos, en la formación del septum de división y en el ensamblado de la pared de ascosporas. Razón por la cual la 1,3-β-glucanasa es un sitio blanco para el desarrollo de nuevas generaciones de agentes anti­fúngicos naturales. Con el objetivo de buscar com­puestos antifúngicos en extractos de plantas, noso­tros implementamos un simple y sensible ensayo para detectar inhibidores de endo-1,3-β-glucanasafúngica en extractos crudos de plantas. El ensayo es especialmente útil para evaluar un gran número de extractos crudos de plantas, está basado en la difusión radial de la enzima glucanasa incluida en pozos realizados en un gel de agarosa, el cual con­tiene el sustrato de la enzima (laminarina). Confor­me el sustrato es depolimerizado en el gel por ac­ción de la enzima, la cual difunde de forma radial, dejando unas zonas circulares alrededor de los po­zos, las cuales no son teñidas por el colorante cal­coflúor. La relación lineal entre el diámetro de la zona hidrolizada y las concentraciones de enzima pura, es la base del método. Se discuten resultados de la utilización del ensayo con extractos de plantas obtenidos con metanol o diclorometano.