Expressão eficiente do gene reporter beta-glucuronidase nos tecidos vasculares de batata (Solanum tuberosum L.) utilizando de um promotor específico (BRA3) de Agrobacterium rhizogenes

Abstract

Promotores tecido-específico controlam a transcrição de genes em diferentes tecidos vegetais bem como em diferentes estádios de desenvolvimento da planta, levando à indução de distintos níveis de atividade transiente e/ou estável do gene. Tais promotores podem ser empregados para a expressão seletiva de genes de interesse. O promotor rol A de Agrobacterium rhizogenes, por exemplo, é floema-específico, sugerindo que possa ser empregado em estratégias de defesa de plantas que são infectadas por vírus com replicação restrita ao floema. A expressão do gene marcador da ß-glucuronidase (gus) dirigido pelo promotor rol A (pBRA3) foi observada em plantas transgênicas de batata (cvs. Macaca e Baronesa). Entrenós e secções de folhas foram submetidos ao cocultivo com A. tumefaciens. A atividade do gene gus avaliada em brotações resistentes à canamicina não se restringiu ao floema (alto nível de expressão do gene), mas também se manifestou no xilema dos caules. As expressões transiente e estável são, no entanto, tecido-específicas, localizadas sobretudo no sistema vascular de entrenós e ausente em raízes e folhas. As plantas gus positivas foram micropropagadas, plantadas em casa de vegetação e avaliadas por PCR, utilizando-se 'primers' específicos para o gene npt II. Nenhuma alteração fenotípica foi observada em plantas transgênicas, em relação às não transformadas.Tissue-especific promoters allow the modulation of gene transcription in different tissue types as well as in different stages of plant development, leading different levels of transient and stable activity of the gene product. These promoters have been employed for selective gene expression. The Agrobacterium rhizogenes rol A gene promoter (BRA3) controls phloem-specific expression indicating that this promoter might have an important role in plant defense strategies against virus which replicated only in the phloem. The expression of ß-glucuronidase (gus) activity drived by BRA3 promoter was observed in transgenic potato plants (cvs Macaca and Baronesa). Entrenodes and leaf explants were infected and cocultivated with A. tumefaciens. The regeneration of putative transformants was in medium with 50 mg.L-1 of kanamycin. High frequency of transformants based upon kanamycin resistance and gus expression was obtained. All gus positive plants showed blue staining in vascular bundle (phloem and xylem). PCR analysis showed the amplification of npt II. No conspicuous phenotipic alteration was observed when comparing transgenic vs non-transgenic plants.