Ajuste de metodologia da eletroforese de proteínas para obtenção de fenótipos isoenzimáticos de moranga

Abstract

Modificações no procedimento eletroforético foram introduzidas para uma satisfatória obtenção de fenótipos isoenzimáticos de moranga (Cucurbita maxima Duchesne). Extratos de folhas definitivas de oito acessos de moranga foram submetidos à análise eletroforética para revelação dos seguintes sistemas: esterase (EST); fosfatase ácida (ACP); transaminase do glutamato oxaloacetato (GOT), desidrogenase do malato (MDH) e peroxidase (PO). Os resultados apontaram a ineficiência do tampão extrator utilizado e satisfatória qualidade do gel de amido de milho nas resoluções dos sistemas EST, ACP, GOT e MDH. Para o sistema PO, adequado efeito de peneiramento molecular só foi possível com a utilização do amido hidrolisado de batata (Sigma). Ajustes no tempo de cozimento do gel, manuseio da corrente elétrica, preparo de soluções corantes e tempo de revelação indicaram os melhores protocolos ao pro-cedimento eletroforético.Changes in the electrophoresis procedures were introduced to obtain a better isozymatic phenotypes of pumpkin (Cucurbita maxima Duchesne). Extracts of eight access of pumpkin's leaves were subjected to electrophoresis analysis in order to reveal the following systems: esterase (EST), acid phosphatase (ACP), glutamate oxaloacetate transaminase (GOT), malato dehydrogenase (MDH) and peroxidase (PO). The results pointed out the inefficiency of the extractor buffer used, and the satisfactory quality of maize starch gel electrophoresis in the resolution of EST, ACP, GOT and MDH systems. For PO system a better effect of "molecular sieving" was only possible when potato starch gel (Sigma) was used. Adjusting the starch cooking time, handling the electric current, preparing the staining solutions and revealing time indicated the best protocol to the electrophoresis process.