Kvantifikacija ekspresije gena lancanom reakcijom polimeraze

Abstract

K lj u č n e r e č i : polimeraza, reakcija stvaranja lanaca; geni, ekspresija; DNK; DNK, polimeraze; dijagnoza. K e y w o r d s : polymerase chain reaction; gene expression; DNA; DNA-directed DNA polymerase; diagnosis. Uvod Lančana reakcija polimeraze (PCR) je metoda koja omo-gućava umnožavanje određenog fragmenta dezoksiribonukle-inske kiseline (DNK) u in vitro uslovima. Sastoji se od tri os-novna koraka: (1) denaturacije dvolančane DNK matrice (naj-češće na temperaturi od 95°C), (2) hibridizacije specifičnih oligonukleotida koji se nazivaju prajmeri (amplimeri, granični-ci) i DNK matrice i (3) ekstenzije prajmera. Ekstenzija prajme-ra je katalizovana Taq ili nekom drugom termostabilnom DNK polimerazom (slika 1). Tri navedena koraka čine jedan ciklus PCR-a koji se tokom reakcije ponavlja 20−45 puta pri čemu se željeni fragment DNK umnoži 10 6 −10 9 puta. Analiza produ-kata lančane reakcije polimeraze obavlja se uz pomoć različitih P Po ol la az zn ni i m ma at te er ri ij ja al l