A Simple Method for the Quantitative Analysis of Tyrosol by HPLC in Liquid Czapek Cultures from Endophytic Fungi

Abstract

O tirosol é provavelmente uma molécula sinalizadora em fungos endofíticos. A análise do tirosol em cultura líquida Czapek de fungo endofítico foi realizada através de cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a detector por arranjo de diodos. As análises foram obtidas em sistema de fase móvel utilizando gradiente, modo linear, iniciando em acetonitrila/água (1:9 v/v) e terminando em acetonitrila 100% em 30 minutos com vazão de 1 mL min-1. Coluna analítica ZORBAX® ODS (250 × 4,6 mm, 5 μm) à 25 oC foi utilizada. Extração líquido-líquido de 0,5 mL do meio (pH 7,0) com acetato de etila e injeção de 20 μL após concentração do solvente sob ar comprimido originou bons resultados. Os parâmetros validados foram: linearidade 0,0125-5,0 μg mL-1 (r = 0,9967), limite de quantificação 0,0125 μg mL-1 obtidos pela média das análises; %CV (precisão) e %E (exatidão) com valores abaixo de 15% e recuperação de cerca de 80%. Além disso, o método desenvolvido apresentou valores de validação satisfatórios demonstrando eficiência na análise do tirosol em meio líquido Czapek. Tyrosol is a possible quorum sensing molecule in endophytic fungi. High-performance liquid chromatography (HPLC) coupled with diode array detector (DAD) was used for the analysis of tyrosol in liquid Czapek fungal cultures. The optimized conditions were gradient mobile phase, in linear mode, consisting initially of acetonitrile/water (1:9 v/v) and increasing up to acetonitrile (100%) in 30 minutes at a flow rate of 1 mL min-1. The column used was a ZORBAX® ODS (250 × 4.6 mm, 5 μm) at 25 oC. Liquid-liquid extraction of 0.5 mL medium (pH 7.0) with ethyl acetate and injection of 20 μL after solvent evaporation under air flow gave good results. Some validation parameters obtained were: linearity 0.0125-5.0 μg mL-1 medium (r = 0.9967), quantification limit of 0.0125 μg mL-1 medium, %CV (precision) and %E (accuracy) bellow 15% and recovery around 80%. Therefore, the developed method presented satisfactory validation parameters and it was efficient for the analysis of tyrosol in Czapek medium.