SPEKTROFOTOMETRYCZNE OZNACZANIE ZAWARTOŚCI BIAŁKA W MONOCYTACH/MAKROFAGACH THP-1 – OPIS METODY

Abstract

Białka są podstawowym elementem budowy tkanek, wchodzą w skład enzymów i hormonów, regulując wiele ważnych procesów życiowych. Zmiany ich stężenia kontrolują procesy metaboliczne komórki. Ilościowe oznaczanie zawartości białek podzielono na metody pośrednie (np. Kjeldahla) i bezpośrednie (biuretowa, Lowry’ego, immunoenzymatyczna, formolowa, metody oparte na wbudowaniu barwników, spektrofotometrii w zakresie nadfioletu oraz oparte na zjawisku selektywnego pochłaniania promieniowania w zakresie podczerwieni). Jednym ze sposobów oznaczania zawartości białek jest metoda spektrofotometryczna opisana przez Bradford. Procedura oznaczenia stężenia protein wykorzystuje zjawisko tworzenia się kompleksu barwnik (Coomassie Brillant Blue G-250)–białko, a natężenie barwy jest proporcjonalne do zawartości białka w roztworze. Celem pracy było sprawdzenie przydatności tej metody do oznaczania zawartości białka w komórkach THP-1 hodowanych z dodatkiem ekstraktów z owocostanów pokrzywy zwyczajnej (Urtica dioica L.). W badaniach wykorzystano wodne i alkoholowe ekstrakty w dwóch stężeniach. Wykazano, że spektrofotometryczne oznaczanie zawartości białka metodą Bradford jest skuteczną i dokładną metodą określenia stężenia protein w makrofagach THP-1. Otrzymane wyniki wskazują, że metodę tę można polecić do oznaczania zawartości białka w innych hodowlach komórkowych.