DESENVOLVIMENTO DE UMA METODOLOGIA DE PCR SEMIQUANTITATIVA UTILIZANDO PLASMÍDIO CLONADO COM PARTE DO GENE GB DE CITOMEGALOVÍRUS

Abstract

A infecção por citomegalovírus é disseminada em nosso meio e costuma aco- meter, com significante morbimortalidade, indivíduos imunodeprimidos, especialmente, trans- plantados de medula óssea e de rim bem como pacientes com AIDS. Neste trabalho, descreve- mos o desenvolvimento de uma PCR semiquantitativa para detectar e quantificar cargas de CMV, presentes em materiais clínicos. Para tanto, inserimos em plasmídios PCR II (Invitrogen, USA), o fragmento com 296 pares-base do gene da glicoproteína B do CMV. Os plasmídios com inserto foram transfectados em , multiplicados, verificados quanto à presença do inserto por seqüenciamento nucleotídico, purificados, e quantificados. Os plasmídios com inserto foram titulados em diluições decimais e as mesmas foram submetidas à PCR descrita anteriormente, que foi, também, utilizada nos testes semiquantitativos, permitindo determinar a sensibilidade Escherichia coli da técnica, 867 cópias de CMV / mg de DNA. Com base nas densidades das bandas eletroforé- ticas dos de amostras clínicas, comparadas às da titulação de plasmídios contendo inserto de glicoproteína B do CMV, obtivemos as cargas virais. A técnica de PCR semiquantitati- va, por nós padronizada, tem, como vantagens, o baixo custo e o fácil manuseio após sua amplicons padronização, podendo ser testada na detecção da carga de CMV em diferentes tipos de pacien- tes com suspeita de citomegalovirose.