Evaluación de métodos fenotípicos y genotípicos para la detección de farmacorresistencia de Mycobacterium tuberculosis.

Abstract

Introducción. La dificultad en el diagnóstico temprano y oportuno de la susceptibilidad a los medicamentos de Mycobacterium tuberculosis hace necesario el diseño y la evaluación de nuevas técnicas que superen la efectividad, reduzcan el costo y el tiempo que toman los métodos tradicionales. Objetivo. Evaluar y comparar dos metodologías fenotípicas y una genotípica, útiles en la determinación rápida de susceptibilidad de M. tuberculosis, teniendo el método de las proporciones múltiples como referencia. Materiales y métodos. Se incluyeron 21 cepas de M. tuberculosis para la evaluación de las metodologías fenotípicas de oxidación y reducción de Alamar azul (Maba) y el bromuro de 3-(4-5-dimetiletiazol-2-il)-2,5-difenil tetrazolio (MTT o Tema), frente a estreptomicina, isoniacida, rifampicina y etambutol. Mediante análisis ROC (receiver operative characteristic curves) se determinó el desempeño de las pruebas y se determinaron los valores pronósticos y el punto de corte para cada antibiótico. Además, mediante tablas de contingencia se determinó el desempeño y los valores predictivos de la metodología genotípica de PCR e hibridación reversa o rifoligotyping, versión 3, en la determinación de las cepas multirresistentes. Resultados. Los perfiles de susceptibilidad por las pruebas colorimétricas se obtuvieron a los 7 días, con valores de área bajo la curva menores de 0,9, sensibilidad de 100% y especificidad mayor de 80%. La metodología de rifoligotyping resultó eficaz en la detección de mutirresistencia, con sensibilidad de 100% y especificidad de 93%. Conclusión. Con los resultados obtenidos consideramos las pruebas Maba, Tema y rifoligotyping como alternativas rápidas y eficaces en la detección de farmacorresistencia de M. tuberculosis, aplicables a pacientes con alto riesgo de desarrollar tuberculosis multirresistente. Palabras clave: Mycobacterium tuberculosis/efecto de drogas, Alamar azul, MTT, rifoligotyping, resistencia a múltiples drogas, tests de sensibilidad microbiana. Phenotypic and genotypic methods for detecting multidrug resistance in Mycobacterium tuberculosis Background. Expeditious charactization of drug susceptibility in Mycobacterium tuberculosis is difficult and, calls for the design and evaluation of faster, cheaper and more effective new techniques. Objective. The aim of the current study was to compare one genotypic and two phenotypic methods for rapid susceptibility detection of M. tuberculosis. Material and methods. Twenty-one M. tuberculosis strains were evaluated by phenotypic methodologies of oxidation and reduction of Alamar blue and MTT in the presence of streptomycin, isoniazid, rifampin and ethambutol. In all tests, the proportion method was applied as the comparison standard. By means of receiver operative characteristic (ROC) analysis, the performance, predictive values and threshold values for all drugs were determined. In addition, the performance of PCR and reverse line blot hybridization in establishing predictive values for sensitivlity and resistance were compared in contingency tables.