PURIFIKASI DAN KARAKTERISASI ENZIM KOLAGENASE DARI Bacillus sp. KUB BPPT CC DENGAN MENGGUNAKAN SUBSTRAT KOLAGEN DARI KULIT CEKER AYAM

Abstract

Kolagenase merupakan endopeptidase yang dapat memecah domain triple helix dari kolagen. Sumber utama substrat kolagen yang digunakan pada penelitian ini adalah kulit ceker ayam, untuk memanfaatkan limbah dari Rumah Potong Ayam dengan jumlah cukup banyak. Ceker ayam merupakan salah satu bagian dari tubuh ayam yang kurang diminati, terdiri atas komponen kulit, otot dan tulang dengan kandungan kolagen yang tinggi pada bagian kulit. Karakteristik kolagen dari sumber yang berbeda menghasilkan karakteristik enzim kolagenase yang berbeda pula. Sehingga dibutuhkan informasi mengenai karakteristik enzim dan aktivitas enzim yang optimum. Penelitian ini bertujuan untuk ekstraksi kolagen, penentuan berat molekul kolagen, karakterisasi kolagen, produksi kolagenase, pemurnian enzim kolagenase, karakterisasi enzim kolagenase crude dan murni. Produksi kolagenase dengan menggunakan media Luria Bertani Broth (LB) cair dan menambahkan 5% kulit ceker ayam. Fermentasi dengan Bacillus sp. KUB BPPT CC dengan variasi waktu 24, 36 dan 48  jam. Waktu produksi optimum adalah 36 jam dengan aktivitas kolagenase 0,1001 U/ml. Pemurnian enzim dilakukan dengan presipitasi amonium sulfat mulai dari konsentrasi 0 hingga 80%, dimana hasil aktivitas optimum dengan presipitasi amonium sulfat 60% (b/v), dilanjutkan dengan kromatografi kolom DEAE Sephadex A-50. Pengendapan dengan amonium sulfat mengakibatkan pemurnian 2,43 kali lipat. Setelah pemurnian dengan kolom DEAE Sephadex A-50, enzim dimurnikan 11,21 kali lipat. Berat molekul enzim kolagenase 42 kDa. Aktivitas optimum kolagenase crude dan murni pada suhu 50oC. Enzim crude memiliki pH optimum 10, sedangkan enzim yang dimurnikan pada pH 7. Pada pengujian aktivitas kolagenase digunakan substrat yang berasal dari kulit ceker ayam. Metode ekstraksi kolagen tergolong kedalam kolagen larut asam dengan uji kolagen yaitu Nilai rendemen kolagen 9,475%, Nilai pH 6,8, Kadar air 5%, Kadar Abu 0,6%, Kadar protein 0,425 mg/ml dan Berat molekul kolagen 130 kDa .