Sekuensing 16S DNA Bakteri Selulolitik Asal Limbah Cairan Rumen Sapi Peranakan Ongole (SEQUENCING OF 16S DNA OF CELLULOLYTIC BACTERIA FROM BOVINE RUMEN FLUID WASTE ONGOLE CROSSBREED)

Abstract

Este estudio tuvo como objetivo identificar el inoculante celulolítico con el código WPL 214 aislado de los desechos fluidos del rumen bovino de la raza Ongole Cross of Surabaya Slaughterhouse. Una sola colonia de aislados celulolíticos cultivados en 5 mL de medio líquido LB (Luria Bertani) consiste en 1% de NaCl, 1% de tripton, 0.5% de extracto de levadura, que contiene 1% de carboximetilcelulosa (CMC) a una temperatura de 37 ° C, usando un agitador de incubadora durante 16-18 horas. Ese aislado se determina mediante el análisis del gen de ADN 16S utilizando la polimerasa de ADN Taq de platino de alta fidelidad con el cebador directo PB36 5′-AGR GTT TGA TCM TGG CTC AG-3 ′ y el cebadorPB38 inverso 5′-GMT ACC TTG TTA CGA CTT-3 ′ para PCR. La secuencia de nucleótidos del fragmento de ADN 16S se determinó mediante el método de secuenciación. Luego, el resultado se comparó con la base de datos de GenBank para reconocer el tipo de bacteria de muestra . El aislamiento del ADN y la amplificación de los genes codificantes del ADN 16S se llevaron a cabo utilizando el Kit High Fidelity Platinum Taq DNA Polymerase. Posteriormente, se aplicó BLAST para identificar el árbol filogenético. La bacteria fue capaz de indicar la existencia de una zona clara en un medio CMC mediante tinción con rojo congo. La existencia de la zona clara asociada con la actividad de los microbios para degradar la celulosa. La conclusión de esta investigación basada en los resultados fue que la secuenciación de nucleótidos del genoma 16S del ADN mostró que el inoculante celulolítico se identificó como Enterobacter cloacae WPL 214.