ISOLASI DAN KLONING GEN α-AMILASE DARI BAKTERI TERMOFILIK PADA Escherichia coli DH5α

Abstract

α-amilase adalah enzim yang dapat memecah pati menjadi glukosa, maltosa, atau dekstrin. Enzim ini memiliki peran penting dan dibutuhkan dalam jumlah banyak di berbagai sektor industri.Enzim α-amilasebiasa digunakan dalam reaksi bersuhu tinggi. α-amilase yang berasal dari hewan, tumbuhan, dan bakteri mesofilik tidak akan stabil pada kondisi reaksi tersebut. Oleh karena itu, dibutuhkan enzim α-amilase yang bersifat termostabil dari bakteri termofilik.Permasalahannya bakteri termofilik masih sulit untuk dikulturkan pada kondisi laboratorium.Maka dari itu, gen pengode enzim α-amilase dari bakteri termofilik perlu diisolasi dan dikloning pada bakteri yang mudah dikulturkan di laboratorium seperti Escherichia coli.Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi gen α-amilase dari bakteri termofilik dan mengkloning pada Escherichia coli DH5α dengan menggunakan vektor pJET1.2/blunt. Sampel yang digunakan dalam penelitian ini berasal dari Kawah Kamojang, Garut, Jawa Barat. Gen α-amilase dari sampel diisolasi dan diamplifikasi dengan metode PCR yang menggunakan primer spesifik. Keberhasilan proses isolasi dan amplifikasi ditentukan oleh metode elektroforesis.Elektroferogram menunjukkan bahwa gen α-amilase yang berukuran 1891 pb dari bakteri termofilik berhasil diisolasi.Gen α-amilase disisipkan pada vektor pJET1.2/blunt untuk menghasilkan plasmid pJET-amilase. Plasmid tersebut dimasukkan ke dalam sel E. coli DH5α dengan metode kejut panas.Keberhasilan proses kloning diuji dengan pengulturan sel pada medium selektif dan analisis restriksi menggunakan enzim restriksi BglII. Gen α-amilase tersebut berhasil dikloning pada E. coli DH5α menggunakan vektor pJET1.2/blunt dengan efisiensi transformasi sebesar 2.44x104 cfu/μg. Kata Kunci: isolasi, kloning, α-amilase, termofilik