Produksi dan Pemurnian Human Epidermal Growth Factor (hEGF) Rekombinan Menggunakan Metode Heat Treatment, fraksionasi amonium sulfat dan kromatografi filtrasi gel

Abstract

Human Epidermal Growth Factor (hEGF) adalah suatu protein yang membantu dalam proses penyembuhan luka, dalam hal proses proliferasi, migrasi dan diferensiasi sel. Protein hEGF dengan tingkat kemurnian tinggi sangat diperlukan agar mencapai aktivitas yang maksimal untuk pengaplikasian sebagai protein terapeutik. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui karakteristik hEGF rekombinan setelah pemurnian menggunakan metode heat treatment, fraksionasi amonium sulfat dan kromatografi filtrasi gel, dan menentukan kadar protein hEGF setelah dimurnikan dengan metode ELISA dan Lowry. Metode yang digunakan pada penelitian ini adalah produksi protein hEGF skala fermentor pada sel inang E. coli. Supernatan hasil produksi dipanaskan pada suhu 80°C. Supernatan hasil pemanasan difraksionasi dengan penambahan garam amonium sulfat hingga terbentuk endapan. Endapan disuspensikan dalam larutan amonium bikarbonat yang selanjutnya dimasukkan ke dalam kolom filtrasi gel Sephadex G-25. Serapan dan konduktivitas dari tiap fraksi diukur. Hasil pemurnian dikarakterisasi dengan SDS-PAGE dan diukur kadar protein dengan ELISA dan Lowry. Hasil penelitian menunjukkan hEGF rekombinan berhasil diproduksi pada inang E. coli BL21 (DE3) [pD881-PelB-hEGF] dengan kadar sebesar 121,76 µg/mL. Produk protein rekombinan berhasil dimurnikan dengan metode heat treatment, fraksionasi amonium sulfat, dan kromatografi filtrasi gel dengan kemurnian sebesar 66,11%