Cytocompatibility evaluation of hydroxyapatite/collagen composites doped with Zn+2

Abstract

The cytocompatibility of synthetic hydroxyapatite/collagen composites alone or doped with Zn+2 was tested by using primary culture of osteoblasts. The hydroxyapatite (HAP) was synthesized having calcium hydroxide and orthophosphoric acid as precursors. A new HAP composite was developed adding 1.05 w% of Zn(NO3)2.6H2O forming HAPZn. The pure type I collagen (COL) was obtained from bovine pericardium by enzymatic digestion method. The HAP/COL and HAPZn/COL composites were developed and characterized by SEM/EDS. The cell viability and alkaline phosphatase activity in the presence of composites were evaluated by MTT assay and NBT-BCIP assay, respectively, and compared to osteoblastic cells of the control. Three individual experiments were accomplished in triplicates and submitted to the variance analysis and Bonferroni’s post-test with statistically significant at p<0.05. The HAPZn/COL composite did not stimulate the proliferation and increasing of alkaline phosphatase activity of the osteoblastic cells. The tested composites did not alter the cellular viability neither caused alterations in the cellular morphology in 72 h showing adequate properties for biological applications.A citocompatibilidade de compósitos sintéticos hidroxiapatita/colágeno dopados ou não com Zn+2 foi avaliada, usando cultura primária de osteoblastos. A hidroxiapatita (HAP) foi sintetizada tendo como precursores o hidróxido de cálcio e o ácido ortofosfórico. Um novo compósito de HAP foi desenvolvido adicionando 1,05% em peso de Zn(NO3)2.6H2O, obtendo-se HAPZn. Colágeno tipo I puro (COL) foi obtido de pericárdio bovino pelo método da digestão enzimática. Os compósitos HAP/COL e HAPZn/COL foram desenvolvidos e caracterizados através de MEV/EDS. A viabilidade celular e a produção de fosfatase alcalina na presença dos compósitos foram avaliadas pelos ensaios de MTT e NBT-BCIP, respectivamente, e comparadas às células osteoblásticas do controle. Três experimentos individuais foram realizados em triplicatas e submetidos à análise de variância e pós-teste de Bonferroni com significância estatística p<0,05. Os compósitos HAPZn/COL não estimularam a proliferação e o aumento da produção de fosfatase alcalina das células osteoblásticas. Os compósitos testados não alteraram a viabilidade celular nem causaram alterações na morfologia celular em 72 h, mostrando propriedades adequadas para aplicações biológicas.