Análise de restrição de DNA ribossomal amplificado (ARDRA) pode diferenciar Fusarium solani f. sp. phaseoli de F. solani f. sp. glycines

Abstract

Métodos moleculares têm sido utilizados para caracterizar a diversidade entre isolados de Fusarium spp. patogênicos e não patogênicos a uma cultura e, para determinar relações genéticas entre formae speciales. Testes de patogenicidade realizados em soja (Glycine max) e feijoeiro (Phaseolus vulgaris) com 17 isolados de Fusarium solani não demonstraram especificidade de hospedeiros. Utilizou-se a técnica ARDRA (Amplified Ribosomal DNA Restriction Analysis) para analisar a região ITS1 - 5,8S rDNA - ITS2, amplificada com os primers ITS5 e ITS4. Os produtos amplificados foram digeridos com as enzimas de restrição Hae III e Msp I. Os padrões de bandas gerados pela digestão com a enzima Hae III permitiram diferenciar três grupos entre os isolados de F. solani, sendo um grupo específico para isolados de F. solani f. sp. phaseoli com 100% de similaridade entre os 11 isolados. Entre os isolados de F. solani f. sp glycines foram observados dois padrões distintos de restrição. A técnica de ARDRA utilizando a enzima Hae III apresenta, portanto, potencial para utilização como um marcador para diferenciação entre as formae specialesphaseoli e glycines, dentro do complexo F. solani.Molecular methods have been used to characterize diversity among pathogenic and non pathogenic isolates of Fusarium spp. and to determine genetic relationships among formae speciales. Pathogenicity tests performed on dry beans (Phaseolus vulgaris) and soybeans (Glycine max)with 17 isolates of Fusarium solani did not demonstrate host specificity. Amplified Ribosomal DNA Restriction Analysis (ARDRA) was used to analyze the ITS1 - 5,8S rDNA - ITS2 region, amplified with primers ITS4 and ITS5. The amplified products were digested with the restriction enzymes Hae III and Msp I. Banding patterns generated by the enzyme Hae III enabled the differentiation of three groups within F. solani, one specific for isolates of F. solani f. sp. phaseoli and the other two for F. solani f. sp. glycines. The ARDRA technique, using the enzyme Hae III, is a promising marker to differentiate the formae specialesphaseoli from glycines within the F. solani complex.