Establecimiento de un protocolo de transformación transitoria y estable de Nicotiana tabacum mediada por Agrobacterium tumefaciens

Abstract

Actualmente las herramientas biotecnológicas como la ingeniería genética y la biología molecular se encuentran muy avanzadas, permitiendo el desarrollo de sistemas que se basan en el uso de células vegetales para la producción de proteínas recombinantes, lo cual permite el desarrollo de plataformas para la elaboración de biofármacos, enzimas y metabolitos secundarios. El uso de metodologías para transformación transitoria y estable, permiten la producción de proteínas recombinantes de interés. En este trabajo se realizó una transformación estable de callo de N. tabacum de la línea comercial BY-2 y una silvestre (T1). Además se realizaron ensayos de agroinfiltración por la técnica al vacío y con la técnica por jeringa. En ambos casos, la transformación fue mediada por Agrobacterium tumefaciens LBA4404 la cual poseía el vector pCAMBIA 1303, conteniendo los genes marcadores GFP y GUS, y un gen de resistencia a Higromicina. Se evaluó la expresión de la proteína verde fluorescente por medio de microscopía de fluorescencia. La expresión de los genes de resistencia a Higromicina y β-glucoronidasa se evaluaron por medio de PCR convencional. Se obtuvieron porcentajes de transformación aceptables, en conjunto con una alta expresión de la proteína verde fluorescente.