Ocorrência e variabilidade genética do Tomato severe rugose virus em tomateiro e pimentão no Estado de São Paulo

Abstract

Um levantamento para avaliar a ocorrência de begomovírus nas culturas de pimentão e tomateiro no estado de São Paulo foi realizado entre janeiro/2007 e julho/2008. O DNA total de amostras de pimentão (710) e de tomateiro (103) foi extraído e a presença de begomovírus foi testada por PCR. Paralelamente, as mesmas amostras foram avaliadas por amplificação por círculo rolante (RCA) seguidas de PCR, e algumas amostras positivas analisadas por RCA-RFLP com a enzima de restrição HpaII, a fim de se conhecer a variabilidade genética dos isolados. Os resultados demonstraram que, para a técnica de PCR, 99 amostras de pimentão (13,94%) e 39 de tomateiro (37,86%) foram positivas para a presença de begomovírus, enquanto que por RCA-PCR, 333 (46,90%) de pimentão e 82 (79,61%) de tomateiro mostrando a maior sensibilidade desta técnica. Seqüências correspondentes à região 5' da capa protéica (CP) e um segmento de gene da região intergênica foram analisadas e indicaram apenas a presença da espécie Tomato severe rugose virus (ToSRV). Porém, seqüenciamento parcial de clones obtidos a partir de produto RCA de tomateiro permitiu a detecção de infecção mista de ToSRV e Tomato yellow vein streak virus (ToYVSV). Por RCA-RFLP quatro padrões de restrição foram observados para o ToSRV em pimentão, enquanto que em tomateiro observaram-se 18 padrões.Os resultados indicam maior diversidade genética dos begomovírus em tomateiro quando comparada com os de pimentão.From January/2007 to July/2008 a survey was carried out to evaluate the occurrence of begomoviruses in pepper and tomato crops from São Paulo State. Total DNA was extracted from 710 pepper and 103 tomato samples, and the presence of begomoviruses was tested by Polymerase chain reaction (PCR). The same samples were tested by Rolling Circle Amplification (RCA) followed by PCR, and some positive samples analyzed by RCA-RFLP and cleaved by the restriction enzyme HpaII to evaluate the genetic variability of these isolates. By PCR, 99 (13.94%) samples collected from pepper and 39 (37.86%) from tomato were positives for the presence of begomovirus, while by RCA-PCR 333 (46.90%) and 82 (79.61%) from pepper and tomato, respectively, indicating higher sensitivity of this technique. The 5' region of the coat protein (CP) gene and a segment of the intergenic region was analyzed indicating the presence of Tomato severe rugose virus (ToSRV) in pepper and tomato plants. However, the partial sequencing of clones from RCA products from a tomato sample indicated mixed infection of ToSRV with Tomato yellow vein streak virus (ToYVSV). By RCA-RFLP four restriction profiles were observed for ToSRV in pepper, while 18 profiles for begomovirus from tomato plants, indicating higher degree of genetic variability for begomovirus found in tomato plants compared to that in pepper plants.