Fetuin O-glikanlarının, Bioaktif N-Glikanların Yeni Endo-B-N-asetilglukozaminidaz Tarafından İzole Edilmesindeki Katkısının Belirlenmesi

Abstract

İnek fetuini N- ve O- glikanları içerdiğinden dolayı farklı glikosidazların aktivitesini test etmek için kullanılan model bir proteindir. Yeni bir glikosidaz olan endo-B-N-asetilglukozaminidaz enzimi (EndoBI-1) bebek bağırsaklarında bulunan Bifidobakteri infantis ’ten tarafımızca daha önceden izole edilmiştir. Bu enzim farklı protein yapılarında bulunan N-glikan merkezlerini kesebilmektedir. Enzimin yüksek aktivite ve geniş substrat aralığından dolayı, peynir altı suyu proteinleri gibi karmaşık yapılarda aktivite gösterebilmektedir. Ayrıca, bu enzim aktivitesini yüksek sıcaklıklarda koruyabildiği için, pastörizasyon gibi ısıl işlem gerektiren süreçlerde de kullanılabilmektedir. İnek peynir altı suyu, yıllık milyonlarca ton üretilen bir glikoprotein kaynağıdır. Fakat, EndobI-1 enziminin bu substrata uygulanması, peynir altı proteinlerinin O-glikanları tarafından bloke edilip aktiviteyi düşürdüğü düşünülmemektedir. O-glikanların, proteinleri bir   korucuyu görevi ile koruyarak, yeni bir prebiyotik kaynağı olarak kabul edilen N-glikanların izolasyonunu zorlaştırmakta olduğu sanılmaktadır. Bu çalışmada, O-glikanlar fetuinden ayrılarak, bunun N-glikanların enzimatik olarak EndoBI-1 tarafından ayrılmasına olan katkısı incelenmiştir. Ayrılan glikanlar kütle spektrometresi ile analiz edilmiş ve izomerler dahil 22 farklı yapı gözlemlenmiştir. Sonuçlara göre, O-glikanların fetuinden ayrılması, N-glikan izolasyon etkinliğini (Kcat/Km) 0.52 ‘den 1.54 ml/mg x min -1 ’a çıkarırken, Km değerini 0.32 ‘den 0.22 mg/ml’ye düşürmüştür. Bu sonuçlara göre, EndobI-1 süt endüstrisinde çok daha etkili bir şekilde kullanabilmesinin yolu açılmıştır.