Transformation of Xanthomonas axonopodis pv. citri by electroporation

Abstract

This study describes the use of electroporation for transforming Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac), the causal agent of citrus (Citrus spp.) canker. It also evaluates the methodology used for this species under different electrical parameters. The bacterium used in the study (Xac 306) was the same strain used for recent complete sequencing of the organism. The use of a plasmid (pUFR047, gentamycin r) is reported here to be able to replicate in cells of Xac. Following the preparation and resuspension of competent cells of Xac at a density of ~4 x 10(10) cfu/ml, in 10% glycerol, and the addition of the replicative plasmid, an electrical pulse was applied to each treatment. Selection of transformants showed a high efficiency of transformation (1.1 x 10(6) transformants/mug DNA), which indicates an effective, and inverse, combination between electrical resistance (50 W) and capacitance (50 µF) for this species, with an electrical field strength of 12.5 kV.cm-1 and 2.7-ms pulse duration. Besides the description of a method for electroporation of Xac 306, this study provides additional information for the use of the technique on studies for production of mutants of this species.É descrito o uso da eletroporação para a transformação de Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac), a agente causal do cancro cítrico, e a avaliação da metodologia para esta espécie sob diferentes parâmetros elétricos. A bactéria utilizada neste estudo (Xac 306) foi a mesma isolado usado recentemente no seqüenciamento completo do organismo. Aqui, é documentado o uso do plasmídeo pUFR047 (gentamicina r) capaz de replicar em células de Xac. Após a preparação e re-suspensão das células competentes de Xac na densidade de ~4 x 10(10) ufc/ml, em 10% glycerol, e a adição do plasmídeo replicativo, um pulso elétrico foi aplicado a cada tratamento. A seleção dos transformantes mostrou uma alta eficiência de transformação (1,1 x 10(6) transformantes/mig DNA), o que indica uma efetiva e inversa combinação entre a resistência elétrica (50 W) e a capacitância (50 µF) para esta espécie, com uma descarga elétrica de 12.5 kV.cm-1 e duração de pulso de 2,7 ms. Além da descrição de método de eletroporação do isolado Xac 306, este estudo fornece informação adicional para o uso da técnica em estudos para a produção de mutantes da espécie.