The effect of DMSO on ITS2 amplification in the molecular identification of Anopheles farauti Laveran (Diptera: Culicidae), from a colony established in the laboratory

Abstract

Sibling species identification is very important in the understanding of malaria epidemiology. Morphological criteria are usually used in the identification of anopheline species, but this fails when sibling or cryptic species occur. Analysis by PCR-RFLP of rDNA ITS2 is currently the most reliable and sensitive method for distinguishing between members of the Anopheles punctulatus group. The objective of this study was to investigate the effect of DMSO concentration on ITS2 amplification of An. farauti from the colony maintained at BATAN Jakarta using PCR-RFLP based on the rDNA ITS2. The results showed that the addition of 6 % and 7 % DMSO produced ITS2 amplification products in the size 750 bp. DMSO could be used in PCR to relieve secondary structures when amplifying high GC templates. Molecular identification of An. farauti is found to be Anopheles farauti sensu stricto.Identifikasi spesies sibling sangat penting untuk mempelajari epidemiologi malaria. Ciri morfologi secara umum digunakan dalam identifikasi spesies Anopheles, namun tidak sesuai ketika digunakan untuk spesies sibling dan spesies kriptik. Analisis dengan menggunakan PCR-RFLP dari ITS2 rDNA pada saat ini merupakan metode yang paling cocok dan sensitif untuk membedakan spesies Anopheles punctulatus group. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh konsentrasi DMSO terhadap amplifikasi ITS2 dalam mengidentifikasi An. farauti dari koloni di BATAN Jakarta dengan PCR-RFLP berdasarkan ITS2 rDNA. Hasil penelitian menunjukkan bahwa penambahan DMSO dengan konsentrasi 6% dan 7% menghasilkan produk amplifikasi ITS2 dengan ukuran 750 pb. DMSO dapat digunakan dalam PCR untuk mencegah terbentuknya struktur sekunder ketika mengamplifikasi template dengan kandungan GC yang tinggi. Identifikasi molekular An. farauti dengan menggunakan PCR-RFLP merupakan Anopheles farauti sensu stricto.