Identificación y análisis de genes ars en cepas de Bacillus hipertolerantes al arsénico, aisladas de pozas termales en Araró, México

Abstract

En este trabajo investigamos la presencia, diversidad y relaciones filogenéticas de genes asociados a la tolerancia al arsénico (As) en 37 cepas del género Bacillus, aisladas de tapetes microbianos localizados en pozas termales en Araró, Michoacán, México. Se diseñaron oligonucleótidos específicos para la amplificación por PCR de los genes arsB (bomba de expulsión de arsenito) y arsC (arsenato reductasa), ACR3 (transportador de arsenito) y aoxB (arsenito oxidasa) del género Bacillus, detectando únicamente los genes arsB y arsC en 21 de las 37 cepas analizadas (56.7% del total). Los análisis tipo Blastx demuestran una alta identidad (84-100%) con bombas de expulsión de arsenito (ArsB) y proteínas arsenato reductasas (ArsC)  de diversas cepas de los géneros Bacillus, Paenibacillus, Psychrobacter y Planococcus. Dichos análisis se confirmaron a través de la construcción de filogenias de los genes arsB y arsC. La detección de los genes arsB y arsC en cepas de Bacillus se correlacionó con valores de hipertolerancia al As, los cuales correspondieron a 32 y 128 mM de arsenito (III) y arsenato (V), respectivamente. Finalmente, los genes arsB y arsC identificados en cepas de Bacillus podrían ser un mecanismo de resistencia al arsénico en un ambiente acuático extremo, como las pozas termales de Araró.In this work we investigated the presence, diversity and phylogenetic relationships of genes that confer resistance to arsenic (As) in 37 strains of the genus Bacillus, isolated from microbial mats in hot springs from Araró, Michoacán, Mexico. Specific oligonucleotides were designed for PCR amplification of the genes arsB (arsenite-specific efflux pump) and arsC (arsenite reductase), ACR3 (arsenite transporter) and aoxB (arsenite oxidase) of the genus Bacillus, detecting only the genes arsB and arsC in 21 out of the 37  analyzed strains (56.7% of the total). The Blastx-type analysis showed a high identity (84-100%) with arsenite efflux pumps (ArsB) and arsenate reductase proteins (ArsC) of various strains of the genera Bacillus, Paenibacillus, Psychrobacter and Planococcus. Such analyzes were confirmed through the construction of phylogenies of the arsB and arsC sequences. The detection of the arsB and arsC genes in Bacillus strains was correlated with As hyperresistance values, which corresponded up to 32 and 128 mM of arsenite (III) and arsenate (V), respectively. Finally, the arsB and arsC genes identified in Bacillus strains could be a mechanism of resistance to As in an extreme aquatic environment, such as in  Araro’s hot springs.