Introduksi Konstruk Gen CsNitr1-L dengan Promotor Ubiquitin melalui Agrobacterium tumefaciens dan Deteksi Molekulernya pada Padi Kultivar Nipponbare

Abstract

Pupuk berbahan dasar Nitrogen seperti urea dan NPK merupakan kebutuhan pokok petani padi. Untuk mengejar peningkatan hasil tanaman, pupuk yang diaplikasikan sering melebihi takaran pupuk yang dianjurkan oleh pemerintah. Hal ini memberikan dampak yang buruk bagi lingkungan sekitarnya. Berdasarkan hal tersebut perlu dilakukan upaya untuk menekan kebutuhan pupuk yaitu dengan merakit tanaman pertanian yang lebih efisien dalam penggunaan N (Nitrogen use efficiency=NUE). Gen CsNitr1-L merupakan salah satu gen terkait efisiensi penggunaan Nitrogen di tanaman. Tujuan penelitian ini adalah untuk merakit konstruks kandidat gen CsNitr1-L pada plasmid pCAMBIA1300-promotor Ubi1 dan memperoleh padi kultivar Nipponbare hasil transformasi yang telah mengandung konstruk kandidat gen CsNitr1-L. Konstruk pCAMBIA- 1300::Ubi1::CsNitr1-L telah berhasil dirakit dan ditransformasikan ke dalam embrio muda tanaman padi kultivar Nipponbare melalui bantuan Agrobacterium tumefaciens strain LBA4404. Proses transformasi menghasilkan 146 galur independen generasi T0 Nipponbare. Analisis PCR pada galur-galur T0 menunjukkan 66 diantaranya positif mengandung gen hptII dan CsNitr1-L. Efisiensi transformasi yang diperoleh adalah sebesar 11,9%. Hasil analisis jumlah salinan transgen menggunakan Southern Hybridization pada beberapa galur T0 positif PCR secara acak menunjukkan sebanyak 4 galur T0 memiliki salinan tunggal transgen. Berdasarkan hasil tersebut, dapat disimpulkan bahwa konstruk gen CsNitr1-L telah berhasil diintroduksikan ke dalam genom tanaman padi kultivar Nipponbare dan telah diperoleh galur-galur T0 yang positif PCR mengandung gen hptII dan CsNitr1-L serta kopi tunggal transgen.