Comparación de tres técnicas de trazado retrógrado para la identificación del origen espinal del nervio ciático en ratón.

Abstract

En el presente trabajo se compararon tres técnicas para la aplicación de dos tipos de trazadores retrógrados fluorescentes (Dil y Fluorogold), con el fin de identificar las neuronas motoras y sensoriales que contribuyen con fibras al nervio ciático en ratones adultos. Se ensayó la aplicación de cristales directamente en el nervio, la inyección intraneural y la impregnación del nervio seccionado usando una cámara de silicona. La localización específica de las neuronas motoras en la médula espinal y las neuronas sensoriales en los ganglios de la raíz dorsal que aportan al nervio ciático de ratón se logró aplicando el Fluorogold mediante una cámara en el cabo proximal de los nervios previamente seccionados. Al utilizar el trazador Dil, la misma técnica no permitió hacer la identificación específica de las neuronas. Se encontró que al nervio ciático de ratón podrían contribuir el ganglio de la raíz dorsal más rostrales que los informados para ratas. Estos resultados muestran que la metodología de aplicación de neurotrazadores en cápsula y la descalcificación de tejidos es útil para la localización de neuronas de ganglios de raíz dorsal y de la médula espinal que componen el nervio ciático de ratón adulto, lo que en el futuro permitirá obtener mayor información sobre la neuroanatomía básica del ratón. Palabras clave: Fluorogold, Dil, neuronas sensoriales, neuronas motoras, ganglio de la raíz dorsal, ratón, nervio ciático, neurotrazadores. Comparison of three neurotracing techniques for identification of the sciatic nerve spinal origin in mice To identify sensory and motor neurons associated with the sciatic nerve in adult mice, three methods for applying fluorescent tracers (Fluorogold and Dil) were investigated: direct applica-tion, intraneural injection and impregnation of a sectioned nerve in a silicone chamber. Most accurate localization of the neurons on the dorsal root ganglia and spinal cord was accom-plished by introducing the proximal stump of a transected sciatic nerve into a silicone chamber, filled with tracers and then decalcifying the tissue. Fluorogold was an effective tracing agent, in contrast to DiI, which was not. In addition to associations with cephalic ganglia L4, L5 and L6, as seen in rats, contributory neurons to the sciatic nerve were located in other ganglia in the mouse. These findings show that the silicone chamber-tissue decalcification technique is a viable tool for obtaining comparative neuroanatomical information in the mouse model.