Comparación de diferentes métodos de extracción de ADN genómico en babosas plagas (mollusca: gasterópoda)

Abstract

La presente investigación fue planteada con el objetivo de comparar tres métodos de extracciónde ADN en muestras de tejido epitelial de babosa (Mollusca: Gasterópoda). Se utilizaron losprotocolos: (1) Extracción con SDS (SDS); (2) Extracción con CTAB y 2β-mercaptoetanol (CTABβ); y (3) Extracción con SDS y proteinasa K (SDSpK); para determinar el método más apropiadode obtención de ADN, de alto peso molecular y pureza, para ser utilizado en análisis genético.Se utilizó la especie de babosa (Arion subfuscus) y seis repeticiones, para un total de 18observaciones. La concentración y pureza del ADN se estimó espectrofotométricamentemidiendo su absorbancia a 260 nm y la relación Abs260/Abs280 nm, respectivamente. Esos datosfueron utilizados para realizar el análisis estadístico, de acuerdo a un diseño completamente alazar con seis repeticiones. En el análisis de la varianza se detectaron diferencias significativas(p<0,01) para la cantidad, concentración y pureza entre los protocolos. En la prueba decomparación entre medias de Tukey, el protocolo (SDSpK) permitió obtener ADN con mayorpeso molecular (2 514,90±291,56) y pureza (1,97±0,02). La calidad del ADN de cada protocolofue verificada mediante PCR-RAPD. Se observó poca reproducibilidad para el cebador OPA-02,del ADN obtenido mediante el procedimiento de extracción SDS; mientras que en los otrosmétodos se logró obtener ADN sin degradación y puro, lo cual permitió observar perfiles deamplificación de alta resolución y bandas reproducibles. Se recomienda utilizar el protocolo(SDSpK) para la obtención de ADN genómico de alto peso molecular, calidad y pureza enbabosas.