KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI UNTUK ANALISIS SENYAWA DIURETIK YANG DISALAHGUNAKAN SEBAGAI DOPING DALAM URIN

Abstract

Abstrak Hidroklorotiazid, furosemid, dan spironolakton sering disalahgunakan sebagai doping dalam olahraga. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan metode simultan penentuan hidroklorotiazid, furosemid, dan spironolakton menggunakan teknik analisis kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT). Analit diekstraksi dari urin dengan metode ekstraksi cair-cair lalu dianalisis secara KCKT elusi landaian. Pengembangan metode mencakup validasi metode melalui pengujian linieritas, presisi, akurasi, batas deteksi dan kuantisasi, serta ketegaran metode. Sistem KCKT untuk penentuan simultan analit menggunakan kolom C 18 , dengan laju alir 1 mL/menit, fase gerak asetonotril-dapar fosfat pH 3, sistem elusi landaian, dan detektor 229 nm. Metodeini menunjukkan hubungan yang linier antara area under the curve (AUC) dan konsentrasi analit dengan koefisien korelasi  0,999 dengan koefisien variasi fungsi regresi  2,6%, sertabatas deteksi dan kuantisasi masing-masing sebesar  0,5 dan  1,9 ppm. Keterulangan AUC ditunjukkan dengan nilai KV  0,95%, dan keterulangan waktu retensi dengan nilai KV  0,14%. Metode ini menunjukkan perolehan kembali  98,6%. Uji ketegaran metode menunjukkan bahwa perubahan laju alir ± 0,1 mL/menit dan pH dapar fosfat ± 0,2 tidak berpengaruh secara signifikan terhadap perolehan semua analit. Namun demikian perubahan panjang gelombang pada kisaran ± 2 nm berpengaruh secara signifikan terhadap perolehan kembali hidroklorotiazid dan spironolakton tetapi tidak untuk furosemid. Berdasarkan hasil pengujian secara keseluruhan dapat disimpulkan bahwa metode simultan penentuan hidroklorotiazid, furosemid, dan spironolakton secara KCKT telah berhasil didapatkan serta mampu memenuhi kriteria validasi metode analisis. Abstract Hydrochlorothiazide, furosemide, and spironolactone are frequently abused for sport doping. The research was aimed to obtain simultaneous method for determination of hydrochlorothiazide, furosemide, and spironolactone by means of high performance liquid chromatographic (HPLC) analytical technique. Analytes were extracted from human urine sample by liquid-liquid extraction method and analyzed by HPLC applying gradient elution system. HPLC system for simultaneous determination of analytes consist of a C18 column with a flow rate of 1 mL/min., a gradient mobile phase of acetonitrile-phosphate buffer pH 3, and a UV detector at 229 nm. This method showed a linear correlation between AUC and concentration of the analytes with a coefficient correlation of  0.999, a relative process standard deviation of  2.6% and a limit of detection (LOD) and a limit of quantitation (LOQ) of  0.5 and  1.9 ppm, respectively. The repeatability of AUC was shown by KV value of  0.95% while that of retention time by KV value of  0.14%. This method showed a recovery of  98.6%. The robustness test results revealed that the fluctuation of flow rate of ± 0.1 mL/min and that of buffer pH of ± 0.2 did not significantly influence the recovery of all analytes. However, the fluctuation of detector wavelength in the range of ± 2 nm gave significant influence on the recovery of hydrochlorothiazide and spironolactone but not for furosemide. Conclusion: Based on overall results it was concluded that simultaneous method for determination of hydrochlorothiazide, furosemide, and spironolactone by means of HPLC was successfully obtained which also fulfilled validation criteria of analytical method.