A sensitive bioassay for destruxins, cyclodepsipeptides from the culture filtrates of the entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorok.

Abstract

Destruxin A, a toxic cyclodepsipeptide, was purified from culture filtrates of the entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorok. by Reverse-Phase HPLC, and assayed for its effects on a larval Manduca sexta (L.) (Lepidoptera: Sphingidae) heart preparation. Destruxin A was found to cause reversible and dose-dependent acceleration of the heart beat. The heart bioassay was highly sensitive to pulse applications of destruxin A at concentrations as low as 35 pmol. Because of its high level of sensitivity, the M. sexta heart bioassay could be used to detect and quantify destruxins in tissue extracts from mycosed insects or to confirm bioactivity of HPLC fractions. The site of action of Destruxin A was not determined. However, this toxin did not act as a 5HT receptor agonist.Destruxina A, um ciclodepsipeptídeo tóxico, foi purificado a partir de filtrados de culturas do fungo entomopatogênico Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorok. pelo método de HPLC, e seus efeitos foram testados em uma preparação de coração da lagarta Manduca sexta (L.) (Lepidoptera: Sphingidae). Destruxina A causou uma aceleração da pulsação de forma reversível e dependente da dose. O bioensaio com o coração foi muito sensível a aplicações pulsáteis de destruxinas mesmo em concentrações muito baixas, como 35 pM. Devido à sua elevada sensibilidade, o bioensaio com o coração de M. sexta pode ser usado para detectar e quantificar estas toxinas em extratos de tecidos de insetos infectados pelo fungo ou para confirmar a atividade biológica de frações de HPLC. O sítio de ação da Destruxina A no coração não foi determinado. Porém, foi confirmado que esta toxina não teve ação no receptor 5HT.