Detección de Clavibacter michiganensis ssp. michiganensis por PCR en plantas de jitomate (Lycopersicon esculentum Mill.)

Abstract

El cáncer bacteriano causado por Clavibacter michiganensis ssp. michiganensis (Cmm), es una enfermedad devastadora del jitomate alrededor del mundo. El objetivo del presente estudio fue describir un procedimiento rápido basado en PCR para la detección de Cmm patogénica en plantas de jitomate. El DNA fue aislado por el método de hervido y se realizó PCR para la amplificación del gen pat-1 (serina proteasa), empleando los oligonucleótidos CMM5F y CMM6R, cuyo tamaño de amplicón fue de 608 pb. El fragmento fue clonado, secuenciado y comparado con la base de datos del NCBI (Centro Nacional para la Información Biotecnológica), mostrando 100% de identidad con secuencias del gen pat-1 de Cmm. Adicionalmente, de la secuencia obtenida se diseñaron 2 pares de oligonucleótidos anidados para producir amplicones de 250 pb a una temperatura de alineamiento de 62 °C. Los resultados descritos en el presente trabajo permitirán la identificación rápida y precisa de Cmm por PCR en semilla y en tejido vegetal de jitomate, al reducir el tiempo de análisis de 24 a 4 h aproximadamente.