CARACTERIZACIÓN MOLECULAR Y GENÓMICA DEL PROCESO DE INTEGRACIÓN DE PROVIRUS DEL VIRUS LINFOTRÓPICO HUMANO (HTLV) TIPO I

Abstract

Se estudió el proceso de integración del HTLV-I desde varios enfoques conceptuales y metodológicos, incluyendo estudios filogenéticos de la integrasa, sus características estructurales y la genómica estructural de la integración de provirus en células linfocitarias de individuos seropositivos. Estructuralmente se observó que los residuos HHCC en la región N-terminal y DDE en el centro catalítico de la enzima estaban conservados en las integrasas del HTLV-I/II, del VIH-1 y del ASV. El grado de expansión clonal de linfocitos infectados en individuos seropositivos con paraparesia espástica tropical, leucemia de células T del adulto y portadores asintomáticos fue variable. El número de amplicones de IPCR fue significativamente mayor en pacientes PET/HAM (8.6 ± 2.5) que en portadores asintomáticos (5.0 ± 1.7) o en pacientes ATL (2.8 ± 3.0) (P<0.004). Las secuencias del genoma humano de 50 nucleótidos que flanquean el 3'LTR presentaron grados de homología variable con cDNA provenientes de varias líneas celulares tumorales y de tejidos normales. Un alineamiento de tales secuencias permitió localizar cromosómicamente los diferentes provirus dentro del genoma humano. Los sitios de integración del HTLV-I en los individuos infectados estuvieron distribuidos de una manera no aleatoria, preferencialmente en secuencias ricas en GC. En los cromosomas 8, 9 y 16 se encontró una mayor cantidad de secuencias provirales. La hibridización sustractiva de fragmentos de DNA humano generados por AFLP permitió una de-dactilarización del fenómeno de integración dentro del genoma humano infectado, metodología que además es susceptible de ser utilizada en otros contextos moleculares.