Determinación y Estandarización de un Método para Cafeína en el Proceso de Torrefacción por Cromatografía Líquida de Alta Eficiencia (Hplc)

Abstract

The work done in the organization. COFFEE COLONIAL.SAS was to evaluate, analyze and verify key information for the identification and standardization of a method for caffeine in coffee roastingprocess by the technique of chromatography high performance liquid (HPLC). Assays were performed at different roasting process to get the right conditions for the samples, supported by transport phenomena such as, energy, fluids and heat, in addition to following the guidelinesof the Standard ISO 2859-1 Colombian NTC. To obtain a standard curve, leading to interpolate coffee samples, prepare a solution with Caffeine (Sigma-Aldrich, Analytical Reagent) and Milli-Q water (Millipore Merck 40 ppm), to obtain a solution pattern, from the solution of caffeine more solutions were prepared by 5 micrograms per milliliter caffeine. To determine the most suitable mobile phase, it began testing different samples of caffeine of coffee with the same water-acetonitrile mobile phase in different proportions, once all the necessary tests and according to the results obtained, the mobile phase allow better separation and interaction with the stationary phase was composed of water-acetonitrile mobile phase in 20:80 ratio. After obtaining the calibration curve and the more appropriate mobile phase, where injections were made different chromatograms were obtained with bases and defined peaks, which are defined by giving a correlation coefficient of linearity close to one, after which the next step was to find the area under the curve to define the caffeine concentration of the samples and thus being able to express in percentage.El trabajo realizado en la organización Café Colonial S.A.S. consistió en evaluar, analizar y verificar información clave para la determinación y estandarización de un método para cafeína en el proceso de torrefacción por la técnica de Cromatografía de Líquidos de Alta Eficiencia (HPLC). Se realizaron diferentes ensayos al proceso de torrefacción hasta obtener las condiciones adecuadas de las muestras, apoyados en fenómenos de transporte como, energía, fluidos y calor, además de seguir los lineamientos de la Norma Técnica Colombiana NTC ISO 2859-1. Con el fin de obtener una recta patrón, importante para interpolar las muestras de café, se preparó una solución con cafeína (Sigma-Aldrich, reactivo analítico) y agua Milli-Q (Merck Millipore 40 ppm), con miras a obtener una solución patrón; a partir de la solución de cafeína, se prepararon 5 solucionesmás por microgramos de cafeína por mililitro. Para determinar la fase móvil más adecuada, se empezó a ensayar con diferentes muestras de cafeína de café con la misma fase móvil agua- acetonitrilo en diferentes proporciones; una vez realizadas todas las pruebas necesarias y de acuerdo con los resultados obtenidos, la fase móvil que permitía una mejor separación e interacción con la fase estacionaria fue la compuesta por agua-acetonitrilo en proporción 20:80. Después de obtener la recta patrón y la fase móvil más adecuada, se realizaron diferentes inyecciones, obteniéndose cromatogramas con bases y picos definidos, con lo que se precisó el coeficiente de correlación, dando una linealidad cercana a uno; después de esto, el paso siguiente fue hallar el área bajo la curva para poder definir la concentración de la cafeína de las muestras y así poderlo expresar en porcentaje.