Induction of pluripotent stem cells by reprogramming human ocular fibroblasts under xeno-free conditions

Abstract

Objetivos: Desenvolver um protocolo padrão, eficiente e xeno-livre, para a reprogramação de células-tronco pluripotentes induzidas, que possa ser usado durante as terapias de células-tronco pluripotentes induzidas para o tratamento de doenças degenerativas da retina, e comparar a eficácia relativa de sistemas de cultivo de origem animal e de origem não animal na geração de células-tronco pluripotentes induzidas. Métodos: Cultivos primários de fibroblastos de pterígio humano e de fibroblastos da cápsula de Tenon humanos foram induzidos a células-tronco pluripotentes induzidas usando um vírus não integrado sob dois sistemas xeno-livres; um sistema tradicional de reprogramação não xeno-livre também foi avaliado como parte deste estudo. Os clones de células-tronco pluripotentes induzidas foram selecionados e contados por coloração de células vivas. As eficiências de reprogramação foram avaliadas entre os diferentes fibroblastos e entre os diferentes sistemas de cultivo. Uma série de experimentos, como o PCR e a coloração por imunofluorescência, foram conduzidos para caracterizar as células-tronco pluripotentes induzidas. Resultados: Células- tronco pluripotentes induzidas derivadas de fibroblastos de pterígio humano e fibroblastos da cápsula de Tenon humanos foram estabelecidas com sucesso sob diferentes sistemas de reprogramação e exibiram propriedades de células-tronco pluripotentes induzidas. As eficiências de reprogramação das células-tronco pluripotentes induzidas usando o sistema de terapia celular, o sistema tradicional e o sistema E6/E8 foram 0,014, 0,028% e 0,001%, respectivamente. Além disso, as eficiências de reprogramação de células-tronco pluripotentes induzidas derivadas de fibroblastos de pterígio humano e de fibroblastos da cápsula de Tenon humanos usando todos os sistemas acima foram de 0,018% e 0,017%, respectivamente. Conclusões: O vírus Sendai pode ser usado para facilitar a reprogramação de fibroblastos oculares pelas células-tronco pluripotentes induzidas. Tanto os fibroblastos de pterígio humano quanto os fibroblastos da cápsula de Tenon humanos são seguros e eficientes para a reprogramação de células-tronco pluripotentes induzidas. Embora as eficiências de reprogramação das células-tronco pluripotentes induzidas de origem ocular sob condições xeno-livres não tenham sido superiores às eficiências observadas para o sistema tradicional de reprogramação, o sistema de reprogramação sistema de terapia celular é uma boa opção para a indução de células-tronco pluripotentes induzidas sob condições xeno-livres.