Desarrollo y caracterización de cultivos neuronales primarios para estudios biomédicos en Panamá

Abstract

Introducción: Los cultivos neuronales primarios son una de las técnicas más utilizadas en investigación preclínica para entender el comportamiento celular y molecular de las células del tejido cerebral, y consisten en el mantenimiento in vitro de células procedentes del cerebro de animales de laboratorio. Estos cultivos pueden variar dependiendo de la población celular que se aísle del tejido y su tratamiento, permitiendo evaluar la interacción de diferentes tipos celulares entre sí o evaluando el comportamiento de un tipo celular específico. Objetivo: El objetivo de este proyecto es desarrollar dos protocolos para cultivos neuronales primarios: un cultivo neuronal enriquecido de neuronas y un cultivo mixto. Metodología: Se utilizaron embriones de 17 días de gestación de ratas Sprague Dawley y se aislaron células de la corteza que se mantuvieron in vitro durante 10 días con diferentes tratamientos para favorecer, o no, un tipo de célula. La caracterización de los cultivos se realizó mediante inmunofluorescencia indirecta con microscopia confocal para obtener las imágenes, y el procesamiento de éstas se realizó utilizando el software ImageJ. Resultados: Se establecieron protocolos para cultivos neuronales primarios enriquecidos de neuronas y para cultivos mixtos. Los cultivos diferían en la cantidad de células totales, proporción de neuronas (90% y 30% respectivamente) y en la cantidad de astrocitos. Estos cultivos podrán ser utilizados para entender el comportamiento de las células cerebrales y la respuesta de estas a diferentes estímulos. Conclusión: Hemos establecido dos protocolos para producir cultivos neuronales primarios: un protocolo para cultivos enriquecidos de neuronas y otro para cultivos mixtos. El cultivo enriquecido podrá ser utilizados para entender el comportamiento específico de las neuronas y su respuesta a diferentes intervenciones, mientras que el cultivo mixto permitirá entender la interacción de las neuronas con las demás células cerebrales y las respuestas que esa interacción produzca.