Properties and specificity of a cell-wall proteinase from Lactobacillus helveticus

Abstract

A cell-wall proteinase activity was extracted from cells of Lactobacillus helvetieus grown on MRS medium. The enzyme was characterized after DEAE-Trisacryl chrornatog-raphy and gel filtration on Ultrogel AcA 34 column. Two proteolytic fractions of different molecular weights were isolated. Their enzyme properties and specificity were clearly similar indicating that these fractions represented the same enzyme. It is a serine proteinase displaying optimum activity at pH 7.5-8.0 and 42 oc. Peptide bonds cleaved in oes l and {3-casein had no corn mon feature and no clear specificity can be defined. The six main pep-tides obtained after {3-casein hydrolysis were identified (Arg.-Leug, HisI06-PheI19, LYS'~6-GlnlSZ' ArglsrPhel9o, LeuI9,-Valzo9' TyrI93-VaIZ09) as weil as the two peptides liberated from oes l-casein (Arg.-Ileç, Arg.-Glus). These peptides whose size varies between 6 and 19 residues have probably to be hydrolysed by membrane-bound peptidases prior to their transport through the cytoplasmic membrane. Sorne of those released from the C-terminal part of {3-casein are potentially bitter. Propriétés et spécificité d'une protéase de paroi de LactobaciIlus helveticus Une activité protéolytique a été extraite de la paroi de cellules de Lactobacillus helveti-eus cultivées sur milieu MRS. L'enzyme était caractérisée après chromatographie d'échange d'ions (DEAE-Trisacryl) et filtration sur gel (Ultrogel AcA 34). Deux fractions protéoly-tiques de poids moléculaire différents ont été isolées. L'étude des propriétés enzymatiques et de la spécificité indique clairement que ces fractions représentent la même enzyme. C'est une protéase à sérine dont les optima d'activité sont pH 7,5-8,0 et 42 "C, Les liaisons pepti-diques rompues sur les caséines oes l et {3 n'ont pas de point commun et les règles gouver-nant la spécificité de l'enzyme ne peuvent être clairement définies. Six peptides obtenus après hydrolyse de la caséine {3 ont été identifiés: Arg.-Leug, Hisl06-PheI19, Lys176-Glnlsz, ArglsrPhel90, Leu191-VaIZ09' Tyrl9r VaIZ09 et deux peptides ont été libérés après hydrolyse de la caséine oes l : Argl-Ile6' Arg.-Glus. Ces peptides dont la taille varie entre 6 et 19 rési-dus sont probablement hydrolysés par les peptidases de membranes avant d'être transportés à travers la membrane cytoplasmique. Certains étaient issus de la partie C-terminale de la caséine {3 et sont potentiellement amers.