Production of Synseed for Hybrid Cymbidium Using Protocorm-Like Bodies

Abstract

Synthetic seed were produced from protocorm-like bodies (PLBs) of hybrid Cymbidium Twilight Moon ‘Day Light’ after culture on a new medium, Teixeira Cymbidium (TC) medium. This new medium contained, in addition to a unique selection of macro- and micronutrients, 0.1 mg/l α-naphthaleneacetic acid and 0.1 mg/l kinetin, 2 g/l tryptone and 20 g/l sucrose, and was solidified with 8 g/l Bacto agar. Several explant types and sizes (intact PLBs, half-PLBs, PLB longitudinal thin cell layers) were tested. In addition, pretreatment of PLB-synseeds with 200 mM KNO3 solution, the addition of activated charcoal or coconut water to synseeds, light vs dark culture, short-term (1 month) and long-term (6 and 12 months) low-temperature (4°C) storage, as well as cryostorage were also tested. All treatments resulted in less PLBs than the control treatment. Among all these treatments, only the use of TC medium or incorporation of coconut water into synseeds resulted in “germination” while lowtemperature storage (1-6 months) was only possible under liquid TC. These results would allow for the short-term preservation of Cymbidium germplasm but not for effective cryopreservation. Otrzymano syntetyczne nasiona z tworów podobnych do protokormu (protocormlike bodies, PLBs) hybrydy Cymbidium Twilight Moon ‘Day Light’ wyhodowanych w kulturach na nowej pożywce Teixeira Cymbidium (TC). Oprócz specjalnie dobranych makro- i mikroelementów ta nowa pożywka zawierała 0,1 mg/l kwasu α- naftalenooctowego i 0,1 mg/l kinetyny, 2 g/l tryptonu i 20 g/l sacharozy, i była zestalona 8 g/l agaru Bacto. Przetestowano kilka rodzajów i rozmiarów eksplantatów (nienaruszone PLBs, pół-PLBs, podłużne cienkie warstwy komórek PLB). Ponadto zbadano wpływ wstępnego traktowania syntetycznych nasion z PLB roztworem 200 mM KNO 3 , dodatku węgla aktywowanego lub wody kokosowej do tych nasion, prowadzenia kultur w świetle i w ciemności, przechowywania krótkoterminowego (1 miesiąc) i długoterminowego (6 i 12 miesięcy) w niskiej temperaturze (4°C), jak również przechowywania kriogenicznego. Wszystkie traktowania dawały w rezultacie mniejszą ilość PLBs niż w traktowaniu kontrolnym. Spośród wszystkich zastosowanych traktowań jedynie wykorzystanie pożywki TC lub zastosowanie wody kokosowej do nasion syntetycznych spowodowało „kiełkowanie”, natomiast przechowywanie w niskiej temperaturze (1-6 miesięcy) było możliwe tylko w ciekłej pożywce TC. Wyniki te wskazują na możliwość krótkoterminowego przechowywania plazmy zarodkowej Cymbidium, ale nie na skuteczną krioprezerwację